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              堿性磷酸酶染色實驗服務

              堿性磷酸酶染色實驗服務

              產品型號:

              所屬分類:病理學檢測實驗

              產品時間:2023-07-26

              簡要描述:提供商: 上海研謹生物
              服務名稱: 堿性磷酸酶染色實驗服務
              規格: 樣本

              詳細說明:

               

               

              堿性磷酸酶染色實驗服務

               

               

              堿性磷酸酶染色實驗技術簡介:

              堿性磷酸酶(AKP) 的顯示方法早由Gomeri (1939) 提出,現在這種方法稱為Gomeri法。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的適條件下分解磷酸單酯,對于與磷酸相接的醇基沒有特異性,Gomeri法是讓該酶在堿性條件下,分解甘油磷酸鈉,產生磷酸根。

              堿性磷酸酶染色實驗技術原理:

              在一定條件下,使細胞中的酶作用于酶的底物,使其產物在原地進行捕捉、沉淀轉化為有色產物。細胞組織中的堿性磷酸酶在堿性(PH9.0- 9.6)環境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚鈉)水解,產生出a蔡酚,然后再與偶氮鹽偶聯,生成不溶性的耐曬染料(終產物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同而有所不同)。

              實驗操作流程:

              1、取材、固定、包埋、切片;

              2.取已粘好烘干的切片兩塊,放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分鐘) 的染缸中進行脫蠟,再經100%乙醇()- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每級各一分鐘,在移切片時,用鑷子夾住切片震蕩并提起,放下反復幾次,在移入下-染缸邊緣前稍停留。讓溶液滴凈后,再入下一染缸,以免把上一染缸溶液過多帶入下-染缸,而影響切片質量;

              3.將其中一塊切片以蠟筆作-標記(用作對照組切片),放入沸水中煮沸5分鐘;

              4.將兩塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鐘,作用液要事先預熱到37"C,水浴中進行:

              5、取出切片在蒸餾水中洗滌;

              6、放入硝酸鈷溶液2-3分鐘;

              7.蒸餾水沖洗干凈,否則切片易被污染,影響定位;

              8、切片浸入硫化銨中2-3分鐘;

              9.蒸餾水沖洗干凈;

              10.經各級酒精脫水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (),各級分鐘在顯微鏡下觀察,細胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的對照切片無黑色沉淀。

               

               

              實驗代做服務:

              ELISA試劑盒免費代檢測

              CCK8檢測

              基因組DNA提取

               

              蛋白相互作用分析

              Western Blot

              免疫組化

              熒光定量PCR

              動物模型服務

              流式細胞檢測

              ROS氧化分析

              激光共聚焦

              DNA甲基化實驗

              細胞劃痕

              鈣離子濃度檢測

              掃描電鏡實驗

              microRNA測序

              動物實驗

              探針合成

              ATP/ADP檢測

              石蠟/冰凍切片

              定點突變

              線粒體膜電位(MMP)檢測

              細胞生長曲線的測定

              藥理毒理動物實驗

               

              免疫共沉淀

              真核表達載體構建

              染色質免疫沉淀CHIP

              非標定量(Label-free)實驗



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